从乡下转学到大都市的训中学园的马娘·特别周，与同学们互相切磋、赌上“日本第一马娘”的称号，目标：在“Twinkle系列”中的胜利！
北部玄驹：矢野妃菜喜 里见光钻：立花日菜 里见皇冠：铃代纱弓 高尚骏逸：夏吉优子 万籁争鸣：MAKIKO 东海帝王：Machico 目白麦昆：大西沙织 黄金船：上田瞳 特别周：和气杏未 无声铃鹿：高野麻里佳 伏特加：大桥彩香 大和赤骥：木村千咲 优秀素质：前田佳织里 双涡轮：花井美春 生野狄杜斯：田泽茉纯 待兼唐怀瑟：远野光 训练员：冲野晃司
特别周：和气杏未 无声铃鹿：高野麻里佳 东海帝皇：Machico 伏特加：大桥彩香 大和赤骥：木村千咲 黄金船：上田瞳 目白麦昆：大西沙织 神鹰：高桥未奈美 草上飞：前田玲奈 星云天空：鬼头明里 春丽：首藤志奈 骏川手纲：藤井雪代 训练员：冲野晃司 东条花：丰口惠美
东海帝皇：Machico 目白麦昆：大西沙织 特别周：和气杏未 无声铃鹿：高野麻里佳 伏特加：大桥彩香 大和赤骥：木村千咲 黄金船：上田瞳 皇帝：田所梓 优秀素质：前田佳织里 双涡轮：花井美春 狄杜斯：田泽茉纯 诗歌剧：远野光 北部玄驹：矢野妃菜喜 里见光钻：立花日菜 训练员：冲野晃司 东条花：丰口惠美
特别周：和气杏未 无声铃鹿：高野麻里佳 东海帝皇：Machico 草上飞：前田玲奈 神鹰：高桥未奈美 星云天空：鬼头明里
未知
不详
阿尔蒂：小松未可子 雷欧：小西克幸 安杰洛：榎木淳弥 维罗妮卡：大原沙耶香 尤利：鸟海浩辅 卡塔丽娜：M·A·O 达恰：安野希世乃
宮子：水橋かおり 由乃：阿澄佳奈 ヒロ：後藤邑子 沙英：新谷良子 荠：小見川千明 乃莉：原田ひとみ 房东：沢城みゆき 桑原先生：桑谷夏子 吉野屋：松来未祐
演员：
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演员：不详
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